血管內皮細胞（vascular endothelial cell，VEC）是襯于血管內表面的單層扁平上皮細胞，是血液與組織的之間的重要屏障。它在調節(jié)炎癥反應，血栓形成，內皮細胞介導的血管舒張，內皮再生等病理生理過程中起關鍵作用，這些過程受到多種復雜機制的調控。隨著人們對于血管內皮細胞功能研究的深入，microRNA在內皮細胞發(fā)揮其功能時的調控作用受到越來越多的關注。多種microRNA可在轉錄后水平調控基因表達，影響內皮細胞的功能，本文對microRNA在內皮細胞炎癥反應、血栓形成、血管舒張、內皮再生功能的調節(jié)機制進行綜述。
目的 探討預存糖原對肝部分切除術中熱缺血再灌注損傷的保護作用。方法 將38 例Child A-B 級擬行肝部分切除的原發(fā)性肝癌患者按入院順序分為試驗組及對照組，每組19 例。試驗組于術前24 h 內靜脈滴注高濃度葡萄糖，對照組不做特殊處理。兩組患者均采用阻斷第一肝門方法行病變肝臟切除術。抽血檢驗所有患者術前及術后第1、5 天的肝功能情況。分別于缺血前、缺血后及再灌注2 h 獲取正常肝組織，檢測所有患者肝組織糖原含量、缺血前、缺血后及再灌注2 h 肝組織超氧化物歧化酶（SOD）活性。采用實時定量PCR 方法檢測肝門阻斷前及再灌注2 h 后肝組織Bcl- 2 mRNA 轉錄水平。結果 試驗組肝組織糖原含量明顯高于對照組（Plt;0.01），術后第1、5 天肝臟功能優(yōu)于對照組（Plt;0.05），在缺血后、再灌注2 h 其SOD 活性高于對照組（Plt;0.05），再灌注2 h 后試驗組Bcl-2 mRNA 表達上調高于對照組。結論 術前預存糖原可顯著減輕患者肝切除術中因實施肝門阻斷所導致的缺血再灌注損傷，其機制可能與預存糖原上調肝臟Bcl-2 mRNA 轉錄有關。
目的 探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默DLL4基因對MCF-7細胞凋亡的誘導及對化療藥物多西他賽的增敏作用。方法 針對DLL4基因的序列設計具有特異性的shRNA，經脂質體轉染MCF-7細胞，作為實驗組，空脂質體轉染的MCF-7細胞為脂質體組，未做任何處理的MCF-7細胞為對照組。采用免疫細胞化學方法檢測3組細胞DLL4蛋白的表達情況；采用流式細胞儀檢測3組細胞凋亡率及細胞周期改變；采用噻唑藍（methyl- thiazoyl-tetrazolium bromide，MTT）法測定3組細胞的增殖情況及對多西他賽的敏感性。結果 實驗組平均光密度值及陽性面積率均低于對照組和脂質體組（P＜0.01）；實驗組細胞在24h、48h及72h時間點A值均低于對照組和脂質體組（P＜0.01）； 轉染后24 h、48 h、72 h及96 h，實驗組細胞凋亡率高于對照組和脂質體組（P＜0.05）；RNA干擾（RNAi）沉默DLL4基因后，實驗組G2/M期細胞比例高于對照組和脂質體組（P＜0.05）；實驗組的IC50值較對照組和脂質體組低（P＜0.05）。結論 RNAi技術抑制DLL4基因的表達能夠抑制MCF-7細胞的增殖、誘導細胞凋亡及增強細胞對多西他賽作用的敏感性。DLL4可能會成為乳腺癌治療的重要靶點。
目的 構建信號傳導及轉錄活化因子3（STAT 3）基因短發(fā)夾RNA（shRNA）表達質粒，探討STAT 3抑制后對胃癌MKN-45細胞增殖、凋亡和侵襲的影響。 方法 根據STAT 3 mRNA 編碼序列，設計RNA干擾靶點，構建STAT 3基因的特異性小RNA干擾質粒 （psiRNA-H1/STAT 3） ，使用脂質體轉染MKN-45細胞，實驗分為對照組、psiRNA-H1轉染組和psiRNA-H1/STAT 3轉染組。通過RT-PCR和Western blot檢測STAT 3特異性小RNA干擾基因對胃癌細胞STAT 3 mRNA和蛋白表達的影響； MTT比色法檢測細胞的生長抑制率； 采用流式細胞術檢測轉染后對MKN-45細胞凋亡的影響； 采用Boyden小室侵襲實驗檢測轉染后MKN-45細胞侵襲力的變化。結果 成功轉染重組體的MKN-45細胞中STAT 3 mRNA和蛋白表達明顯下降（ P ＜ 0.05）。psiRNA-H1/STAT 3轉染組各時相均明顯抑制MKN-45細胞生長，且MKN-45細胞凋亡率為34.26% ，相比對照組（3.75% ）和psiRNA-H1轉染組（4.43% ）明顯升高（ P ＜ 0.01） 。另外，psiRNA-H1/STAT 3轉染組MKN-45細胞侵襲力較另外2組明顯減弱（ P ＜ 0.01）。結論 成功構建了針對STAT 3基因的shRNA表達載體，通過轉染MKN-45細胞，在體外能有效抑制人胃癌細胞STAT 3 mRNA和蛋白表達，細胞增殖、侵襲能力減弱并且促進細胞凋亡，為STAT 3基因靶向治療提供一定的實驗依據。
目的 研究內皮素-3(endothelin-3,ET-3)mRNA的表達水平與急性胰腺炎時胰腺炎癥程度的關系。方法 將54只SD大鼠編號后隨機分為4組，其中假手術組9只，胰腺炎組、動脈給藥組和靜脈給藥組〔多巴胺： 5 μg/（kg·min）〕各15只，按Aho法用4.5%?；悄懰徕c膽胰管逆行注射制作急性胰腺炎模型，分別在1、6及24 h取胰腺組織,采用半定量逆轉錄聚合酶鏈式反應檢測ET-3基因的轉錄水平，并觀察各組胰腺組織病理變化，確定ET-3 mRNA的表達水平與胰腺炎炎癥程度的關系。結果 模型制作后1、6及24 h均可見到ET-3 mRNA表達，各組（除假手術組外）均以6 h時ET-3 mRNA表達最強。除1 h外，動脈給藥組ET-3 mRNA表達量明顯低于靜脈給藥組及胰腺炎組（P＜0.05，P＜0.01）； 而假手術組在任何時相均明顯低于另外3組（P＜0.05，P＜0.01）。各組胰腺組織病理學評分按假手術組→動脈給藥組→靜脈給藥組→胰腺炎組的順序逐漸升高。結論 ET-3 mRNA的表達與胰腺炎炎癥程度有一定關系，ET-3 mRNA表達量隨胰腺炎嚴重程度的加重而增加； 急性胰腺炎中，多巴胺動脈給藥比靜脈給藥有效。
目的 運用siRNA技術在肝癌細胞株中建立穩(wěn)定低表達人胰島素樣生長因子1類受體（IGF1R）基因的細胞株。方法 構建包含封閉IGF1R基因的真核表達載體pSUPER-IGF1R-siRNA，轉染SMMC7721和Hep3B細胞，G418篩選表達穩(wěn)定的細胞株。通過RT-PCR、Western-blot分析與鑒定IGF1R mRNA和蛋白及cyclin D1、cyclin B1蛋白的表達，并繪制細胞生長曲線。結果 在SMMC7721和Hep3B細胞中成功建立低表達IGF1R基因的細胞株，其生長明顯減慢(P＜0.05),且其cyclin D1表達亦明顯下降(P＜0.05)。結論 pSUPER-IGF1R-siRNA能抑制SMMC7721和Hep3B細胞的生長。
目的 研究RNA干擾(RNAi)對兔血管平滑肌細胞（VSMCs）bcl-2基因表達的干擾效應。方法 用脂質體法將構建的裝載靶向bcl-2基因小干擾性RNA(siRNA)的表達載體(pshRNA-bcl-2質粒)轉染VSMCs（基因組），以轉染空載體的細胞和加DMEM的空白細胞作為對照，采用半定量RT-PCR 和Western blot法檢測bcl-2基因的表達，用MTT法檢測VSMCs生長情況。結果 轉染siRNA的表達載體可以抑制內源性bcl-2基因在轉錄和轉譯水平上的表達，基因組bcl-2的mRNA和蛋白表達較空載體組和空白對照組明顯減少(P＜0.01)； 基因組的VSMCs生長也較空載體組和空白對照組明顯受到抑制(P＜0.01)。結論 載體介導的RNAi技術可明顯抑制內源性bcl-2基因的表達和VSMCs生長
【摘要】目的 探討RNA干擾(RNA interference， RNAi)技術在大腸癌基因治療研究中的應用。方法 復習近幾年的相關文獻并進行綜述。結果 RNAi能夠高效特異地沉默同源基因表達，可在大腸癌發(fā)生、發(fā)展多個環(huán)節(jié)發(fā)揮重要作用。結論 RNAi技術為大腸癌基因治療研究開辟了新的途徑。
目的觀察反義DNA甲基轉移酶3b（DNMT3b）基因真核表達載體轉染對人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因表達的影響。方法構建反義DNMT3b基因真核表達載體，通過脂質體轉染到人膽管癌細胞株QBC-939中，G418篩選得到穩(wěn)定轉染細胞株，PCR鑒定外源性neoR基因在轉染細胞中的表達以確定轉染是否成功。半定量RT-PCR觀察轉染前后DNMT3b基因mRNA水平的變化，流式細胞術檢測轉染前后DNMT3b蛋白的變化。 結果反義DNMT3b基因真核表達載體轉染能使人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因的mRNA水平從0.956±0.053降低至0.209±0.023，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）； 流式細胞術檢測結果顯示，DNMT3b蛋白水平從(75.38±3.22)%降低到(29.87±3.46)%，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。結論反義DNMT3b基因轉染能降低人膽管癌QBC-939細胞中DNMT3b基因的表達水平，為研究DNMT3b基因功能及其在膽管癌細胞中的作用提供了方法和實驗依據。
目的 探討大腸癌患者外周血CK20 mRNA的表達及其意義。 方法 用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）方法檢測42例大腸癌患者術前、術后外周血及20例大腸癌患者新鮮癌組織標本中CK20 mRNA的表達，另以20例健康成年自愿者作對照。 結果 42例大腸癌患者外周血CK20 mRNA呈陽性表達者術前為19例（45.24%），術后為14例（33.33%）； 20例大腸癌患者新鮮癌組織中CK20 mRNA表達均為陽性。而正常對照組20例外周血CK20 mRNA表達均為陰性。且大腸癌外周血CK20 mRNA陽性表達與組織學類型無關（Pgt;0.05），但與有無淋巴結轉移、肝轉移及Dukes分期有關（P＜0.05）。 結論 檢測外周血中CK20 mRNA表達將有助于大腸癌的早期診斷、預后的判斷及治療方案的制定。