目的 觀察細(xì)胞內(nèi)Ca2+及MERTK基因在人視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細(xì)胞的吞噬功能中所起的作用及二者的相互關(guān)系。方法 用視細(xì)胞外節(jié)膜盤（ROS）于37℃孵育培養(yǎng)的RPE細(xì)胞，在孵育不同終止吞噬反應(yīng)。雙重?zé)晒鈽?biāo)記法檢測 RPE細(xì)胞吞噬動力學(xué)；鈣離子熒光探針負(fù)載法在熒光顯微鏡下測定RPE細(xì)胞內(nèi)Ca2+的變化；半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RTPCR）法檢測相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)MERTK 基因表達(dá)的變化及施加Ca2+激活劑（A23187載體）或拮抗劑（verapamile）后MERTK 基因表達(dá)的變化。結(jié)果 RPE細(xì)胞與ROS孵育過程中，ROS結(jié)合于RPE細(xì)胞表面發(fā)生在15 min時(shí)，RPE細(xì)胞吞噬ROS在24 h時(shí)達(dá)到飽和。細(xì)胞內(nèi)Ca2+在孵育15 min 時(shí)升高，并在24 h內(nèi)保持高水平；MERTK 基因表達(dá)在RPE細(xì)胞與ROS孵育5 min時(shí)增強(qiáng)，并在全部孵育過程中呈現(xiàn)出高表達(dá)狀態(tài)；以A23187載體開放鈣通道升高RPE細(xì)胞內(nèi)Ca2+后，MERTK 基因信使核糖核酸（mRNA）水平升高，并呈劑量依賴性。經(jīng)A23187預(yù)處理后的孵育實(shí)驗(yàn)中所檢測到的MERTK mRNA水平除3 h 這一時(shí)間點(diǎn)外均高于對照組； verapamile拮抗RPE細(xì)胞內(nèi)Ca2+后，MERTK 基因表達(dá)明顯下降并呈劑量依賴性；以verapamile預(yù)處理后繼續(xù)與ROS孵育，所檢測到的MERTK基因在24 h內(nèi)均低于對照組。結(jié)論 MERTK基因及細(xì)胞內(nèi)Ca2+發(fā)揮著維持RPE細(xì)胞吞噬過程的重要作用，MERTK作為上游調(diào)控信號啟動下游的細(xì)胞內(nèi)Ca2+信號來維持RPE細(xì)胞對ROS的攝入過程。
【摘要】目的 研究新城疫病毒（NDV）和阿霉素（ADM）對肝癌SMMC-7721細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)及肌動蛋白的影響。方法 將肝癌SMMC-7721細(xì)胞分為2組，向其中一組加入NDV（NDV組），另一組加入ADM（ADM組）。設(shè)8、16、24、36和48 h 5個(gè)時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行培養(yǎng)。用免疫熒光法檢測細(xì)胞肌動蛋白和Ca2+，用免疫組化法檢測CD44，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1），用掃描電鏡觀察細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果 隨著NDV和ADM作用時(shí)間的延長，細(xì)胞縮小、變圓； 肌動蛋白斷裂，排列紊亂，2組肌動蛋白平均熒光強(qiáng)度均降低，NDV組較ADM組下降更明顯，8 h時(shí)2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而于16、24、36和48 h時(shí)2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（36 h時(shí)P＜0.01，其余時(shí)相P＜0.05）；2組癌細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度逐漸增高，NDV組增高幅度明顯大于ADM組，在8 h和16 h時(shí)差異雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但已有差異的趨勢，于24、36和48 h時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別P＜0.01，P＜0.05和P＜0.01)；2組癌細(xì)胞表達(dá)的CD44逐漸減弱；2組ICAM-1平均熒光強(qiáng)度逐漸升高，至36 h時(shí)達(dá)峰值，2組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述各指標(biāo)同一組內(nèi)各時(shí)相間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論NDV和ADM均可使癌細(xì)胞變性、破裂，NDV較ADM效果更強(qiáng)。
目的 觀察COPD 大鼠氣道平滑肌細(xì)胞( ASMCs) 的鈣激活性鉀通道( KCa ) 的活性變化, 以及11, 12-表氧化二十碳三烯酸( 11, 12-EETs) 對氣道平滑肌細(xì)胞KCa 的作用。方法 40 只雄性SD 大鼠隨機(jī)分為正常對照組和COPD 組, 每組20 只。在相對密閉艙內(nèi)吸入紙煙建立COPD 動物模型, 采用急性酶分離法分離大鼠ASMCs, 應(yīng)用膜片鉗技術(shù), 分離出KCa 電流, 測定KCa 開放概率( Po) 、平均開放時(shí)間( To) 和平均關(guān)閉時(shí)間( Tc) 。比較COPD 組和正常對照組KCa上述活性指標(biāo)的變化, 以及應(yīng)用3 μmol / L 的11, 12-EETs 對COPD 組ASMCs 細(xì)胞進(jìn)行灌流后KCa活性的變化。結(jié)果 與正常對照組比較, COPD 組ASMCs 的KCa 通道Po 明顯降低( 0. 084 ±0. 028 比0. 198 ±0. 029, P lt;0. 01) , To 顯著縮短[ ( 0.732 ±0. 058) ms 比( 1. 648 ±0. 152) ms, P lt; 0. 01] , Tc 顯著延長[ ( 12. 259 ±2. 612) ms 比( 6. 753 ±1. 237) ms, P lt; 0. 01] 。而用11, 12-EETs 灌流ASMCs 細(xì)胞后可明顯激活KCa活性, Po 增加( 0.227 ±0. 059 比0. 084 ±0. 028, P lt; 0. 01) , To 延長[ ( 2.068 ±0. 064) ms 比( 0. 732 ±0. 058) ms, P lt;0. 01] , Tc 縮短[ ( 4. 273 ±0. 978) ms 比( 12. 259 ±2. 612) ms, P lt; 0. 01] 。結(jié)論 COPD大鼠ASMCs 細(xì)胞KCa通道活性降低可能在COPD 發(fā)病機(jī)制中起著一定作用, 11, 12-EETs 可以直接激活COPD大鼠ASMCs 細(xì)胞KCa活性, 提高膜電位穩(wěn)定性, 從而松弛COPD大鼠氣道平滑肌。
目的 觀察缺血預(yù)處理對脊髓缺血損傷細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化的影響. 方法 將44只健康新西蘭大白兔隨機(jī)分為三組:缺血組20只,缺血預(yù)處理組20只,假手術(shù)組4只.缺血組于左腎動脈下夾閉腹主動脈40分鐘后開放灌注;缺血預(yù)處理組夾閉腹主動脈5分鐘,開放15分鐘,再次夾閉40分鐘后開放再灌注;假手術(shù)組動物手術(shù)操作同缺血組,但不夾閉腹主動脈.分別于夾閉40分鐘后即刻、開放再灌注2小時(shí)、8小時(shí)、24小時(shí)和72小時(shí)各時(shí)相點(diǎn)測定脊髓組織Ca2+含量,并評定、記錄動物后肢神經(jīng)功能. 結(jié)果 缺血預(yù)處理組脊髓組織Ca2+顯著低于缺血組各時(shí)相值;再灌注8小時(shí)后神經(jīng)功能評分缺血預(yù)處理組明顯高于缺血組(P＜0.01). 結(jié)論 缺血預(yù)處理具有降低神經(jīng)元胞漿游離Ca2+濃度,防止Ca2+超載,穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的能力,對主動脈阻斷所致的脊髓缺血損傷有良好的保護(hù)作用.其表現(xiàn)為明顯降低癱瘓發(fā)生率,增加術(shù)后神經(jīng)評分.
心肌頓抑是心臟直視手術(shù)后心功能障礙的主要病理基礎(chǔ) ,其確切發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明。近年來細(xì)胞分子水平的研究表明 ,缺血再灌注后心肌葡萄糖氧化延遲恢復(fù)引起細(xì)胞內(nèi) H+ 聚積 ,H+ - Na+ 交換增強(qiáng)致使 [Na+ ]i 超負(fù)荷 ,進(jìn)而 Na+ - Ca2 + 交換增強(qiáng)導(dǎo)致一過性 [Ca2 + ]i 超負(fù)荷 ,[Ca2 + ]i 超負(fù)荷又可激活 Ca2 + 依賴性蛋白酶引起肌鈣蛋白 發(fā)生部分選擇性降解 ,很可能是造成心肌頓抑的關(guān)鍵機(jī)制。這些研究進(jìn)展為進(jìn)一步揭示心肌頓抑機(jī)制提供了新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
通過檢索MEDLINE和Cochrane圖書館,了解鈣通道阻滯劑的作用機(jī)制,對其應(yīng)用于腦卒中一﹑二級預(yù)防的證據(jù)進(jìn)行總結(jié)和評價(jià).結(jié)果發(fā)現(xiàn),鈣通道阻滯劑除具有降低血壓作用以外,還有抗動脈粥樣硬化的作用,能夠降低中風(fēng)的發(fā)生率,在腦卒中一級預(yù)防中有一定作用,但也有增加心臟病變包括心肌梗塞和心衰的風(fēng)險(xiǎn).目前尚無證據(jù)證明鈣通道阻滯劑在腦卒中二級預(yù)防中的效果,因此不推薦鈣通道阻滯劑作為腦卒中預(yù)防的一線藥物.