老年性黃斑變性（AMD）是老年人視力喪失的主要原因。近年來，許多學(xué)者對AMD發(fā)病機制作了大量深入研究，發(fā)現(xiàn)老化與代謝失調(diào)、循環(huán)障礙、光損害與氧化損傷、炎癥反應(yīng)及相關(guān)的分子遺傳學(xué)改變等，均與AMD發(fā)病有關(guān)。現(xiàn)就AMD發(fā)病機制研究進展綜述如下。 (中華眼底病雜志, 2006, 22:283-285)
目的 觀察激光誘導(dǎo)小鼠脈絡(luò)膜新生血管（CNV）中C9的表達及眼鏡蛇毒因子（CVF）對CNV的抑制作用。方法 C57BL/6J小鼠36只隨機分為對照組、單純激光光凝組、CVF干預(yù)組，每組12只。后兩組用激光光凝方式建立CNV模型。CVF干預(yù)組在激光光凝前2 d和激光光凝后每天以0.1 mu;g/g的劑量腹腔注射CVF；激光光凝后6 d，采用熒光素眼底血管造影檢查確定單純激光光凝組小鼠CNV形成。其后1、3、5、7 d，斷頸處死各組小鼠后摘除眼球作冰凍切片。采用蘇木精-伊紅（HE）和鏈霉親和素生物素過氧化物酶復(fù)合物熒光素異硫氰酸鹽（SABC-FITC）免疫熒光組織化學(xué)染色法觀察膜攻擊復(fù)合物（MAC）中C9的表達。連續(xù)冠狀切片后，選取免疫熒光SABC-FITC染色切片組織像，采用Image-Pro Plus 6.0圖像處理分析軟件測量平均累積吸光度［A，舊稱光密度（OD）］值。結(jié)果 單純激光光凝組CNV形成后7 d，單純激光光凝組仍可見CNV，CVF干預(yù)組未見CNV形成。單純激光光凝組CNV形成后1、3、5、7 d，單純激光光凝組均可見C9表達，CVF干預(yù)組均未見C9表達。對照組、單純激光光凝組及CVF干預(yù)組3組間平均累積A值比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=146.045，P=0.000）。各組組內(nèi)在單純激光光凝組CNV形成后1、3、5、7 d各時間點平均累積A值比較，差異也有統(tǒng)計學(xué)意義（F=9.725， P=0.000）。結(jié)論 激光誘導(dǎo)小鼠CNV中存在C9表達；CVF誘導(dǎo)補體消耗可抑制CNV形成。
玻璃體腔注射抗血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）藥物治療滲出型老年性黃斑變性（wAMD）的有效性已被證實，其藥物包括貝伐單抗、雷珠單抗等單克隆抗體類藥物和阿柏西普、康柏西普等融合蛋白類藥物。但仍有部分患者經(jīng)抗VEGF藥物治療后療效不佳，包括初治無應(yīng)答或應(yīng)答不佳，甚至治療過程中病情反復(fù)。由于抗VEGF藥物的作用靶點及分子特點不同，抗VEGF藥物的更換應(yīng)用以及給藥模式、給藥劑量、給藥間歇期的調(diào)整等，成為療效欠佳的應(yīng)對策略。但現(xiàn)存的眾多研究所得結(jié)果不盡相同，視網(wǎng)膜解剖結(jié)構(gòu)的恢復(fù)獲益更多，視力改善相對困難。何種治療方案獲益最大，仍有待大樣本臨床隨機對照研究和長期隨訪進一步探索。
增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病在眼部的嚴重并發(fā)癥，可導(dǎo)致嚴重視力下降甚至完全的視力喪失。近年來，隨著手術(shù)設(shè)備和眼底檢查技術(shù)的快速發(fā)展，基于玻璃體切割手術(shù)的治療方法在適應(yīng)證范圍、手術(shù)技術(shù)改進和應(yīng)用、與藥物（抗血管內(nèi)皮生長因子藥物，糖皮質(zhì)激素）聯(lián)合應(yīng)用，以及手術(shù)評估等方面均取得了新的進展。以影像學(xué)為主的手術(shù)評估可以在手術(shù)前、手術(shù)中、手術(shù)后對患者眼部情況進行連貫監(jiān)測，臨床醫(yī)生可以對不同患者進行不同的手術(shù)方案和手術(shù)時機的選擇，有助于減輕患者痛苦，獲得更好的視力結(jié)局。
目的觀察氧化應(yīng)激條件下骨形成蛋白4（BMP4）對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞（RPE）增殖和遷移的影響，初步探討其對RPE細胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的作用。方法 將體外培養(yǎng)的人RPE細胞分為正常組、單純4-羥基壬烯醛（HNE）組（4-HNE組）、4-HNE+空白對照組（4-HNE+NC組）、4-HNE+小干擾BMP4組（4-HNE+siBMP4組）。噻唑藍比色法檢測4-HNE對RPE細胞增殖的影響；細胞劃痕實驗測定4-HNE、BMP4對細胞遷移能力的影響；免疫熒光染色、蛋白質(zhì)免疫印跡法、實時定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測細胞中BMP4的表達；熒光顯微鏡拍照觀察siBMP4轉(zhuǎn)染效率；流式細胞術(shù)檢測細胞線粒體活性氧（MitoSOX）水平；免疫熒光實驗檢測細胞內(nèi)EMT標志物鈣粘蛋白E（E-cadherin）和纖維連接蛋白（Fibronection）的表達。兩組間比較采用t檢驗，三組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果與正常組比較，4-HNE組細胞增殖、遷移能力明顯增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=21.619、24.469，P＜0.05）；細胞內(nèi)BMP4表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=19.441，P＜0.05）；BMP4 mRNA、蛋白相對表達量亦顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=26.163、37.163，P＜0.05）。轉(zhuǎn)染siBMP4 24 h后，RPE細胞中BMP4轉(zhuǎn)染效率＞90%。與4-HNE組、4-HNE+NC組比較，正常組、4-HNE+siBMP4組細胞內(nèi)BMP4蛋白（F=27.241）、mRNA（F=36.943）相對表達量、細胞遷移率（F=46.723）、MitoSOX水平（F=39.721）顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；上皮標志物E-cadherin表達顯著增多，間充質(zhì)標志物Fibronection表達顯著降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F= 51.722、45.153，P＜0.05）。結(jié)論 氧化應(yīng)激條件下BMP4抑制RPE增殖和遷移；BMP4參與誘導(dǎo)RPE細胞的EMT過程。
目的 觀察人胚胎干細胞（hESC）向視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞誘導(dǎo)分化過程中微小核糖核酸（miRNA）-204和211的變化特征。方法 采用自然分化法誘導(dǎo)hESC向RPE細胞分化，細胞鑒定。按細胞誘導(dǎo)分化時間秩序，分為hESC組、含色素細胞組、hESC源性RPE細胞組和原代培養(yǎng)的人胎RPE（hfRPE）細胞組。行miRNA基因表達譜芯片分析、miRNA-204和211實時熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測。 結(jié)果 miRNA芯片分析結(jié)果顯示，隨細胞誘導(dǎo)分化過程， miRNA-204持續(xù)上調(diào)。其中，含色素細胞組是hESC組的5.026倍，hESC 源性RPE細胞組是含色素細胞組的3.337倍；hfRPE細胞組是hESC源性RPE細胞的13.574倍。miRNA-211在細胞誘導(dǎo)分化過程中上調(diào)不明顯，但從hESC源性RPE細胞到hfRPE細胞，上調(diào)倍數(shù)為44.333倍，是miRNA表達譜中差異最大的miRNA。RT-PCR檢測結(jié)果顯示，hESC組、含色素細胞組、hESC源性RPE細胞組、hfRPE細胞組miR-204相對表達量分別為91.81plusmn;4.43、2 263.09plusmn;206.39、5 996.80plusmn;235.42、171 676.45plusmn;999.82，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=18.22、20.66、279.38，P＜0.001）；miRNA-211相對表達量分別為2.23plusmn;0.31、129.33plusmn;3.75、125.76plusmn;4.78、16 682.00plusmn;352.97。含色素細胞組和hESC細胞組、hfRPE細胞組和hESC源性RPE細胞組miR-211相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=58.58、81.24，P＜0.001）。結(jié)論 miRNA-204和211在hESC向RPE細胞誘導(dǎo)分化過程中持續(xù)單一變化。
目的觀察聚嘧啶束結(jié)合蛋白相關(guān)剪接因子（PSF）高表達對高濃度4-羥基壬烯醛（4-HNE）誘導(dǎo)下人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞（hRMEC）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）氧化應(yīng)激損傷的保護作用。方法體外培養(yǎng)的對數(shù)生長期hRMEC分為正常組、單純4-HNE處理組（單純4-HNE組），空載質(zhì)粒聯(lián)合4-HNE處理組（Vec+4-HNE組）、PSF高表達聯(lián)合4-HNE處理組（PSF+ 4-HNE組）。單純4-HNE組、Vec+4-HNE組、PSF+4-HNE組細胞培養(yǎng)基加入10 μmol/L 4-HNE，刺激12 h。其后，Vec+4-HNE組、PSF+4-HNE組應(yīng)用轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000分別導(dǎo)入pcDNA空載體、pcDNA-PSF真核表達質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24 h。正常組細胞常規(guī)培養(yǎng)。流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率；2'，7'-二氯二氫熒光素雙乙酸鹽探針檢測各組細胞內(nèi)活性氧（ROS）表達水平。蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測各組細胞內(nèi)ER氧化物蛋白1（Ero-1）、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶（PDI）、C/EBP同源轉(zhuǎn)錄因子（CHOP）、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP）78、蛋白激酶R樣ER激酶（pERK）/磷酸化pERK（p-pERK）、真核起始因子（eIF）2α/磷酸化eIF（peIF）、活化轉(zhuǎn)錄因子4（ATF4）蛋白相對表達量。組間比較行單因素方差分析。結(jié)果單純4-HNE組、Vec+4-HNE組、PSF+4-HNE組細胞凋亡率分別為（22.50±0.58）%、（26.93±0.55）%、（11.70±0.17）%；細胞內(nèi)ROS表達量分別為0.23±0.03、1.60±0.06、0.50±0.06。三組間細胞凋亡率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=24.531，P＜0.05）；Vec+4-HNE組ROS表達水平較單純4-HNE組、PSF+4-HNE組顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=37.274，P＜0.05）。正常組、單純4-HNE組、Vec+4-HNE組、PSF+4-HNE組細胞ER中Ero-1、PDI蛋白相對表達量分別為1.25±0.03、0.45±0.03、0.63±0.03、1.13±0.09和1.00±0.10、0.27±0.10、0.31±0.05、0.80±0.06；CHOP、GRP78蛋白相對表達量分別為0.55±0.06、1.13±0.09、0.90±0.06、0.48±0.04和0.48±0.04、1.25±0.03、1.03±0.09、0.50±0.06。4組Ero-1（F=43.164）、PDI（F=36.643）、CHOP（F=42.855）、GRP78（F=45.275）蛋白相對表達量比較，差異均有有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。4組細胞ER p-pERK/pERK（F=35.755）、peIF2α/eIF（F=38.643）、ATF4（F=31.275）蛋白相對表達量比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論PSF可抑制高濃度4-HNE誘導(dǎo)的細胞凋亡及ROS產(chǎn)生；其作用機制與恢復(fù)ER穩(wěn)態(tài)平衡及下調(diào)pERK/eIF2α/ATF4通路的活化水平密切相關(guān)。
目的觀察并分析缺氧狀態(tài)下SB431542對視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞的作用。方法體內(nèi)動物實驗：健康C57BL/6J小鼠48只，隨機分為正常組、氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變（OIR）組、OIR+二甲基亞砜（DMSO）組、OIR+SB431542組，每組各12只。小鼠17日齡時，作視網(wǎng)膜鋪片觀察新生血管情況；蘇木精-伊紅染色計數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜（ILM）的血管內(nèi)皮細胞核數(shù)。體內(nèi)細胞實驗：人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞（hRMEC）分為正常組、缺氧組、缺氧+DMSO組、缺氧+SB431542組。噻唑藍（MTT）比色法檢測細胞增殖情況；Matrigel體外三維成型法檢測SB431542對hRMEC管腔形成的影響；細胞劃痕實驗檢測hRMEC內(nèi)細胞遷移情況；Seahorse XFe96細胞能量代謝分析儀測定細胞內(nèi)糖酵解、糖酵解儲備、糖酵解容量的細胞外酸化率（ECAR）。多組間比較采用單因素方差分析。結(jié)果體內(nèi)動物實驗：與正常組比較，OIR組新生血管增多（t=41.621，P＜0.001）；與OIR組比較，OIR+SB431542組突破ILM的血管內(nèi)皮細胞核數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=36.183，P＜0.001）。MTT比色法檢測結(jié)果顯示，與正常組、缺氧+SB431542組比較，缺氧組、缺氧+DMSO組細胞增殖顯著增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=39.316，P＜0.01）；缺氧+SB431542組細胞增殖較缺氧+DMSO組顯著降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=26.182，P＜0.001）。正常組、缺氧組、缺氧+DMSO組、缺氧+SB431542組細胞完整管腔形成數(shù)、遷移細胞數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（F=34.513、41.862，P＜0.001、＜0.01）。與缺氧+DMSO組比較，缺氧+SB431542組細胞完整管腔形成數(shù)、遷移細胞數(shù)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=44.723、31.178，P＜0.001、＜0.01）。細胞能量代謝測定結(jié)果顯示，與缺氧+DMSO組比較，缺氧+SB431542組細胞內(nèi)糖酵解、糖酵解儲備的ECAR降低，糖酵解容量的ECAR增高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=26.175、33.623、37.276，P＜0.05）。結(jié)論SB431542可抑制缺氧誘導(dǎo)的hRMEC增殖、遷移及管腔形成能力，并降低細胞糖酵解水平。
目的 觀察聚嘧啶束結(jié)合蛋白相關(guān)剪接因子（PSF）高表達對過氧化氫（H2O2）誘導(dǎo)下視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞凋亡的影響。 方法 體外培養(yǎng)的人RPE細胞分為正常細胞組、損傷組（N+H2O2組）、空載體對照組（Vec+H2O2組）、PSF高表達組（PSF+H2O2組）。應(yīng)用脂質(zhì)體2000將pEGFP空載體、pEGFP-PSF真核表達質(zhì)粒分別導(dǎo)入Vec+H2O2組、PSF+H2O2組；N+H2O2組僅作轉(zhuǎn)染處理；正常細胞組為正常培養(yǎng)細胞。細胞轉(zhuǎn)染24 h后，以200 μmol/L H2O2刺激細胞2 h。蘇木精-伊紅染色觀察各組細胞形態(tài)；噻唑藍比色法檢測N+H2O2組、Vec+H2O2組、PSF+H2O2細胞活性，以酶聯(lián)免疫檢測儀測量波長490 nm處各組細胞的吸光度[A，舊稱光密度（OD）]值表示；LIVE/DEAD?細胞活性/細胞毒性試劑盒檢測各組細胞生存力；細胞凋亡檢測試劑盒檢測N+ H2O2組、Vec+H2O2組、PSF+H2O2組細胞凋亡；二氯熒光素二乙酸酯檢測各組細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平。 結(jié)果 N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞體積縮小，胞質(zhì)致密濃縮、嗜酸性染色增強；PSF+H2O2組細胞形態(tài)尚飽滿，胞質(zhì)染色較均勻，偶見體積縮小。與PSF+H2O2組比較，N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞活性下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=46.98，P=0.000）。正常細胞組細胞呈綠色，偶見紅色熒光；N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞中呈紅色熒光的死亡細胞數(shù)量明顯增多，呈綠色熒光的活細胞數(shù)量顯著減少；PSF+H2O2組活細胞數(shù)量明顯增多，死亡細胞數(shù)量顯著減少。與N+H2O2組、Vec+H2O2組細胞凋亡比較，PSF+ H2O2組細胞凋亡下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=62.24，P=0.000）。與N+H2O2組、Vec+H2O2組比較，PSF+H2O2組細胞中ROS表達量下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=295.235，P=0.000）。 結(jié)論 高表達PSF通過抑制ROS的產(chǎn)生緩解H2O2誘導(dǎo)的人RPE細胞凋亡。