目的 探索G蛋白偶聯(lián)受體激酶結(jié)合蛋白1(G protein coupledreceptor kinase interacting protein 1, GIT1)的RNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)(hairpin)(GIT1-RNAh)對(duì)成骨細(xì)胞遷移的影響，并分析其機(jī)制。方法 取培養(yǎng)至第6代的鼠成骨細(xì)胞，隨機(jī)分成兩組，分別用包含GIT1-RNAh(實(shí)驗(yàn)組)和綠色熒光蛋白(green fluoresenceprotein, GFP)的RNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)(GFPRNAh)的腺病毒(對(duì)照組)感染12 h后，再將每組分成有、無(wú)血小板源性生長(zhǎng)因子(platelet drived growth factor, PDGF)刺激的兩組。免疫熒光染色方法檢測(cè)成骨細(xì)胞內(nèi)源性GIT1蛋白表達(dá)和Paxillin的位置。 Western Blot檢測(cè)Paxillin的磷酸化。 構(gòu)建包含藍(lán)色熒光蛋白的GIT1-RNAh(CFP-GIT1-RNAh)實(shí)驗(yàn)組和GFP-RNAh(CFP-GFP-RNAh)(對(duì)照組)， 免疫熒光雙染的方法檢測(cè)CFP-GIT1-RNAh和 CFP-GFP-RNAh對(duì)Paxillin位置的特異性作用。 用劃痕愈合法檢測(cè)GIT1-RNAh(實(shí)驗(yàn)組)和GFP-RNAh(對(duì)照組) 腺病毒對(duì)成骨細(xì)胞在PDGF刺激下的遷移能力的影響。結(jié)果 免疫組織化學(xué)觀察，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組比較，明顯抑制成骨細(xì)胞內(nèi)源性的GIT1蛋白表達(dá)和擾亂Paxillin的分布。 Western Blot觀察，和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組明顯抑制了Paxiliin的磷酸化(P＜0.05)。劃痕愈合法檢測(cè)觀察，和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組明顯抑制成骨細(xì)胞的遷移。結(jié)論 GIT1-RNAh通過(guò)擾亂Paxillin的分布和其磷酸化從而抑制成骨細(xì)胞的遷移。
目的研究抑制樁蛋白(Paxillin)磷酸化對(duì)機(jī)械通氣相關(guān)性肺損傷的效應(yīng)。 方法60只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、保護(hù)性通氣組、大潮氣量通氣組和PP2抑制劑組, 每組15只。正常對(duì)照組僅做氣管切開; 保護(hù)性通氣組進(jìn)行保護(hù)性機(jī)械通氣2 h, 大潮氣量通氣組進(jìn)行大潮氣量機(jī)械通氣2 h; PP2抑制劑組通氣前1 h腹腔注射酪氨酸蛋白激酶抑制劑PP2并進(jìn)行大潮氣量機(jī)械通氣2 h。正常對(duì)照組在自然吸氣2 h, 其余組在機(jī)械通氣結(jié)束時(shí)處死, 光鏡觀察肺組織病理學(xué)改變并進(jìn)行彌漫性肺泡損傷(DAD)評(píng)分; 測(cè)定髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性; 計(jì)算肺濕/干重比值(W/D); 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)肺泡灌洗液中腫瘤壞死因子(TNF-α)的水平; 伊文思藍(lán)法檢測(cè)肺血管通透性; 蛋白免疫印跡法檢測(cè)磷酸化樁蛋白(p-Paxillin)和Paxillin表達(dá)情況; TUNEL法檢測(cè)原位細(xì)胞凋亡。 結(jié)果大潮氣量通氣組和PP2抑制劑組的DAD評(píng)分、伊文思藍(lán)滲出量、W/D、MPO及TNF-α差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各組細(xì)胞原位凋亡率從高到低排序:大潮氣量通氣組＞PP2抑制劑組＞保護(hù)性通氣組＞正常對(duì)照組。p-Paxillin的表達(dá)量在大潮氣量通氣組中最高, 與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。保護(hù)性通氣組、大潮氣量通氣組和PP2抑制劑組間Paxillin的表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論抑制Paxillin磷酸化可以明顯改善機(jī)械通氣相關(guān)性肺損傷。