目的 構(gòu)建人microRNA-210(miR-210)慢病毒重組載體并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細胞株(human umbilical vein endothelial cells 12,HUVE-12),探討其過表達對HUVE-12 成血管的影響,為研究血管再生機制提供實驗模型。方法 構(gòu)建pGCSIL-GFP-pre-miR-210 重組質(zhì)粒表達載體并轉(zhuǎn)染HUVE-12,熒光顯微鏡觀察GFP 陽性表達細胞數(shù)及實時熒光定量PCR 法檢測miR-210 表達變化;細胞分為空病毒對照組(LV-GFP 對照組)和miR-210 轉(zhuǎn)染組(LV-miR-210-GFP 組),流式細胞儀檢測各組細胞ephrinA3 表達變化;ELISA 檢測細胞培養(yǎng)上清中VEGF 含量;將兩組細胞分別接種于Matrigel 觀察血管形成能力。 結(jié)果 重組載體經(jīng)酶切、測序鑒定正確,GFP 表達強度在轉(zhuǎn)染后48 ~ 72 h 達峰值;實時熒光定量PCR 檢測結(jié)果顯示:LV-miR-210-GFP 組miR-210 表達水平較LV-GFP 對照組增加9.72 倍(t= —11.10,P=0.00)。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示LV-miR-210-GFP 組ephrinA3 陽性細胞率為12.52% ± 0.67%,明顯較LV-GFP 對照組(73.22% ± 1.45%)降低(t= —66.12,P=0.00);ELISA 檢測結(jié)果顯示LV-miR-210-GFP 組細胞上清中VEGF 含量顯著高于LV--GFP 對照組([ 305.29 ± 16.52)pg/mL vs.(42.52 ± 3.11)pg/mL](t= —27.06,P=0.00);血管形成能力實驗顯示LV-miR-210-GFP 組毛細血管管腔數(shù)為17.33 ± 6.33,較LV-GFP 對照組(6.33 ± 2.33)顯著增加(t= —2.83,P=0.04)。 結(jié)論 成功構(gòu)建miR-210 慢病毒重組載體,并能在HUVE-12 中穩(wěn)定表達,過表達miR-210 能明顯增強HUVE-12 血管形成能力,為進一步研究miR-210 調(diào)控血管新生的分子機制奠定了實驗基礎(chǔ)。