目的 綜述京尼平作為交聯(lián)劑在天然生物材料改性中的應用及研究進展。 方法 查閱近年關(guān)于京尼平作為交聯(lián)劑在天然生物材料改性中應用的相關(guān)文獻，進行分析總結(jié)。 結(jié)果 天然交聯(lián)劑京尼平交聯(lián)效率高，細胞毒性顯著低于傳統(tǒng)人工合成的化學交聯(lián)劑，交聯(lián)后的生物制品穩(wěn)定性強，抗酶解效果顯著提高。 結(jié)論 京尼平有望替代人工合成的傳統(tǒng)化學交聯(lián)劑，為組織工程中天然生物材料的交聯(lián)改性提供更好的選擇。
目的 研究NGF 對人真皮成纖維細胞增殖、細胞周期、膠原合成和遷移的影響，探討NGF 在創(chuàng)傷修復中的作用。 方法 采用酶消化法體外分離培養(yǎng)人真皮成纖維細胞，取第3 代細胞進行實驗。分別加入0、25、50、100、200、400 ng/mL NGF，培養(yǎng)48 h 采用MTT 法檢測細胞增殖；加入0、100 ng/mL NGF，培養(yǎng)48 h 采用流式細胞儀分析細胞有絲分裂周期，采用羥脯氨酸法檢測培養(yǎng)液膠原含量，實時熒光定量PCR 測定細胞Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA 表達水平；建立體外細胞劃痕創(chuàng)傷模型，加入0、50、100、200 ng/mL NGF，培養(yǎng)24 h 觀察細胞遷移。 結(jié)果 MTT 法檢測結(jié)果顯示，各濃度組間細胞增殖的吸光度值比較差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。在0、100 ng/mL NGF 作用下，細胞周期顯示兩組的G0/ G1 期、S 期、G2/M 期細胞百分率差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05），羥脯氨酸法測得兩組細胞培養(yǎng)液膠原含量和實時熒光定量PCR 測定細胞Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA 表達水平差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。細胞遷移實驗結(jié)果顯示，培養(yǎng)24 h 后0、50、100、200 ng/mL NGF 濃度組細胞遷移率分別為52.12% ± 6.50%、80.67% ± 8.51%、66.33% ± 3.58% 和61.19% ± 0.97%，50、100 ng/mL NGF 可顯著促進細胞遷移（P lt; 0.05）。 結(jié)論 NGF 對人真皮成纖維細胞增殖、細胞周期及Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA 表達無影響，不能促進膠原合成，但能促進人真皮成纖維細胞遷移。
【摘 要】 目的 綜述細胞治療臨床應用的新進展。 方法 廣泛查閱近年有關(guān)細胞治療臨床應用研究的文獻并進行綜述。 結(jié)果 在細胞生物學尤其是干細胞生物學飛速發(fā)展的基礎(chǔ)上，細胞治療已開始應用于心血管系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關(guān)疾病、糖尿病以及壓力性尿失禁等多種疾病的臨床試驗研究，并取得了令人振奮的初步研究成果，展示了廣闊的臨床應用前景。 結(jié)論 細胞治療為人類疾病治療提供了一種新的治療手段，具體作用機制還有待進一步研究。
目的 綜述杜興肌營養(yǎng)不良癥（Duchenne muscular dystrophy，DMD）治療的最新研究進展。 方法 廣泛查閱近年來相關(guān)文獻，對DMD治療的研究進展進行綜述。 結(jié)果 目前對DMD的治療主要有基因治療、細胞治療和藥理學治療，基因治療和細胞治療通過傳遞正常基因或修正突變基因以及移植正常細胞，如干細胞來進行治療；而藥理學治療主要針對dystrophin基因缺陷引起的下游事件，運用各種藥物來減緩DMD病理進程，從而改善患者的生活質(zhì)量，延長壽命。 結(jié)論 針對DMD的各種治療手段均存在一定困難，目前尚不能有效治療此病，還需要研究探索更有效的治療途徑。
目的 了解WO-1在體外環(huán)境中對人成骨細胞增殖、分化的影響，為骨組織工程學研究提供更多的方法。方法 采用培養(yǎng)人胚成骨細胞，以生長曲線和3 H-TdR法分析WO-1與成骨細胞生物學效應的量效關(guān)系，在最佳作用濃度下，以接種細胞克隆形成率，流式細胞技術(shù)分析細胞周期，透射電鏡觀察細胞形態(tài)學，了解WO-1對細胞活性和細胞增殖的影響；以ALP活性檢測，3 H-Proline摻入實驗，放射免疫法測骨鈣素合成及I型膠原和骨鈣素mRNA的表達等，從蛋白質(zhì)和mRNA兩個水平觀察WO1對細胞功能的影響。結(jié)果 WO-1在高濃度時對人胚成骨細胞增殖有抑制作用，低濃度時對人胚成骨細胞增殖有促進作用，最佳作用濃度8 μg/ml，在0.25～8 μg/ml濃度范圍內(nèi)存在量效關(guān)系。在8 μg/ml WO-1作用下，實驗組人胚成骨細胞接種克隆形成率增加，克隆體積增大；群體倍增時間明顯縮短，電鏡下見細胞器較對照組發(fā)達；而ALP活性、Ⅰ型膠原合成、骨鈣素合成等，在蛋白質(zhì)及mRNA兩個水平均有增加，且與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論 低濃度WO-1，可促進體外培養(yǎng)的人胚成骨細胞活性及增殖，加強細胞合成Ⅰ型膠原、骨鈣素等基質(zhì)的功能，可用作成骨細胞增殖及分化的促進劑。
目的 研究組織工程骨體外構(gòu)建過程中，成骨細胞與生物衍生骨相互作用的基因表達。方法用人胚骨膜來源的成骨細胞與生物衍生骨體外復合培養(yǎng)構(gòu)建組織工程骨。培養(yǎng)2、4、6、8和10 d，分別提取總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。用熒光及TaqMan探針行實時定量PCR，分別擴增成骨細胞特異轉(zhuǎn)錄因子（Cbfa1）、成骨細胞特異基因（Osterix）、Ⅰ型膠原、骨鈣素（osteocalcin，OC）和整合素α5和β1（Integrin α5 and β1），讀取擴增循環(huán)數(shù)（Ct值），進行統(tǒng)計學分析。以單純培養(yǎng)的成骨細胞作為對照組。 結(jié)果 Cbfa1與Osterix變化一致，其中實驗組Osterix在2 d和 8 d的表達均明顯高于對照組（P＜0.05)。Ⅰ型膠原與OC的表達變化一致，實驗組除10 d時，其余各時間段Ⅰ型膠原表達均明顯低于對照組（P＜0.01)。Intgerin的表達始終處于較高水平，在培養(yǎng)最初的2 d，實驗組Integrin β1表達明顯高于對照組（P＜0.01)。結(jié)論 成骨細胞與生物衍生材料復合后，重要基因可持續(xù)正常表達。作為支架材料，生物衍生骨在保持成骨細胞性狀、誘導及促進成骨細胞分化方面有明顯優(yōu)越性；它不僅對細胞順利進入增殖狀態(tài)無影響，而且為細胞增殖提供廣闊而有效的空間。成骨細胞最終可良好分化，充分發(fā)揮成骨功能，并有利于成骨細胞黏附，黏附行為貫穿細胞與材料相互作用的整個過程，而并非局限于開始階段。
目的 比較培養(yǎng)關(guān)節(jié)軟骨和半月板軟骨細胞的生物學特性，探討培養(yǎng)軟骨作為半月板移植替代物的可能性。方法 分別自3周齡大耳白兔關(guān)節(jié)軟骨和半月板分離軟骨細胞，行單層傳代培養(yǎng)和離心管培養(yǎng)。將離心管培養(yǎng)形成的軟骨和6周齡兔半月板行組織學和透射電鏡觀察，比較關(guān)節(jié)軟骨細胞和半月板纖維軟骨細胞的生長曲線。流式細胞術(shù)檢測第2、4代關(guān)節(jié)軟骨細胞和半月板纖維軟骨細胞周期。結(jié)果 第4代關(guān)節(jié)軟骨細胞呈去分化，似成纖維細胞。離心管關(guān)節(jié)軟骨細胞培養(yǎng)能形成軟骨，半月板纖維軟骨細胞不能形成軟骨。培養(yǎng)軟骨和半月板的組織學及超微結(jié)構(gòu)差異顯著，培養(yǎng)軟骨中軟骨細胞5%呈現(xiàn)凋亡。第2、4代關(guān)節(jié)軟骨細胞中亞二倍體細胞比例明顯多于第2、4代半月板纖維軟骨細胞（Plt;0.05）。結(jié)論 半月板來源的軟骨細胞經(jīng)離心管培養(yǎng)不能形成軟骨組織，關(guān)節(jié)軟骨細胞離心培養(yǎng)形成軟骨不能作為半月板的移植物，關(guān)節(jié)軟骨和半月板軟骨組織存在明顯的區(qū)別。
目的 探討離心管培養(yǎng)軟骨作為移植材料的可能性。方法 3周齡兔關(guān)節(jié)軟骨細胞經(jīng)離心管培養(yǎng) 2周形成軟骨 ,另取 6周齡兔肱骨頭關(guān)節(jié)軟骨、脛骨近端生長板和半月板 ,并對 4種軟骨進行透射電鏡觀察 ,比較其軟骨細胞和細胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)。結(jié)果 離心管培養(yǎng)軟骨具有獨特的超微結(jié)構(gòu) ,與關(guān)節(jié)軟骨和生長板有一定的相似性 ,而與半月板有明顯區(qū)別。4種軟骨都形成了各自不同的細胞和細胞外基質(zhì)特征 ,離心管培養(yǎng)軟骨呈現(xiàn)典型軟骨細胞凋亡 ,生長板表現(xiàn)“黑暗”軟骨細胞 ,關(guān)節(jié)軟骨和半月板未見細胞凋亡。結(jié)論 離心管培養(yǎng)軟骨具有獨特的超微結(jié)構(gòu) ,可作為關(guān)節(jié)軟骨和生長板的移植物。