目的 構(gòu)建人microRNA-210（miR-210）慢病毒重組載體并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株（human umbilical vein endothelial cells 12，HUVE-12），探討其過表達(dá)對HUVE-12 成血管的影響，為研究血管再生機(jī)制提供實驗?zāi)Ｐ?。方?構(gòu)建pGCSIL-GFP-pre-miR-210 重組質(zhì)粒表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染HUVE-12，熒光顯微鏡觀察GFP 陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)及實時熒光定量PCR 法檢測miR-210 表達(dá)變化；細(xì)胞分為空病毒對照組（LV-GFP 對照組）和miR-210 轉(zhuǎn)染組（LV-miR-210-GFP 組），流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞ephrinA3 表達(dá)變化；ELISA 檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF 含量；將兩組細(xì)胞分別接種于Matrigel 觀察血管形成能力。 結(jié)果 重組載體經(jīng)酶切、測序鑒定正確，GFP 表達(dá)強(qiáng)度在轉(zhuǎn)染后48 ～ 72 h 達(dá)峰值；實時熒光定量PCR 檢測結(jié)果顯示：LV-miR-210-GFP 組miR-210 表達(dá)水平較LV-GFP 對照組增加9.72 倍（t= —11.10，P=0.00）。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示LV-miR-210-GFP 組ephrinA3 陽性細(xì)胞率為12.52% ± 0.67%，明顯較LV-GFP 對照組（73.22% ± 1.45%）降低（t= —66.12，P=0.00）；ELISA 檢測結(jié)果顯示LV-miR-210-GFP 組細(xì)胞上清中VEGF 含量顯著高于LV--GFP 對照組（[ 305.29 ± 16.52）pg/mL vs.（42.52 ± 3.11）pg/mL]（t= —27.06，P=0.00）；血管形成能力實驗顯示LV-miR-210-GFP 組毛細(xì)血管管腔數(shù)為17.33 ± 6.33，較LV-GFP 對照組（6.33 ± 2.33）顯著增加（t= —2.83，P=0.04）。 結(jié)論 成功構(gòu)建miR-210 慢病毒重組載體，并能在HUVE-12 中穩(wěn)定表達(dá)，過表達(dá)miR-210 能明顯增強(qiáng)HUVE-12 血管形成能力，為進(jìn)一步研究miR-210 調(diào)控血管新生的分子機(jī)制奠定了實驗基礎(chǔ)。
用雜種狗作實驗。切取雙側(cè)髂骨,作成帶有骨膜和少量肌肉以及不帶骨膜的骨塊,分別移植到爪部皮下和掌骨缺損區(qū)。術(shù)后定期切取標(biāo)本,進(jìn)行肉眼觀察,測量體積,組織學(xué)檢查。發(fā)現(xiàn):術(shù)后1周有血管再生。帶有骨膜的髂骨塊比不帶骨膜的髂骨再生血管多,吸收少。髂骨塊植入掌骨缺損區(qū)比植入皮下血管再生多。
目的探討血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）聯(lián)合堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）對大鼠后肢動脈硬化閉塞血管再生的機(jī)制。 方法雄性SD大鼠60只，建立后肢動脈硬化閉塞模型，按隨機(jī)數(shù)字表法將其分為4組：生理鹽水組（NS組）、VEGF組、bFGF組及VEGF+bFGF組。NS組、VEGF組隔天于腹腔分別注射生理鹽水1 mL、100μg/L rhVEGF 1 mL；bFGF組隔天于后肢股內(nèi)側(cè)多點肌肉注射100μg/L rhbFGF 1 mL；VEGF+bFGF組隔天于腹腔注射100μg/L rhVEGF 1 mL及于后肢股內(nèi)側(cè)多點肌肉注射100μg/L rhbFGF 1 mL，共治療21 d。第30 d時行血管造影檢查觀察大鼠后肢動脈硬化閉塞血管再生情況；第3個月時，取后肢股內(nèi)側(cè)肌肉組織分別應(yīng)用Western blot和RT-PCR法檢測其組織中VEGF和bFGF蛋白和mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果①血管造影結(jié)果顯示，VEGF+bFGF組側(cè)支血管新生條數(shù)明顯多于bFGF組（P＜0.05）、VEGF組（P＜0.05）及NS組（P＜0.001），bFGF組和VEGF組也明顯多于NS組（P＜0.05），bFGF組和VEGF組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。②Western blot和RT-PCR檢測結(jié)果均顯示，VEGF和bFGF蛋白和mRNA表達(dá)在VEGF+bFGF組均明顯高于NS組（P＜0.001）、VEGF組（P＜0.001）和bFGF組（P＜0.001）；VEGF組和bFGF組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論VEGF和bFGF聯(lián)合應(yīng)用能夠上調(diào)大鼠后肢缺血區(qū)組織中VEGF、bFGF的含量，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和分化、毛細(xì)血管出芽生長，使缺血區(qū)血管新生，為外周動脈疾病的臨床治療提供新方法。
組織工程氣管移植成功已有報道，脫細(xì)胞氣管支架的制備技術(shù)基本成熟，氣管移植過程中上皮、軟骨及血管再生問題就顯得尤為重要。隨著各種獲取和培養(yǎng)細(xì)胞的方法及促細(xì)胞生長分化的因子研究日趨成熟，使用組織工程技術(shù)實現(xiàn)氣管的上皮、軟骨及血管再生成為可能，解決氣管的上皮、軟骨及血管再生具有重要的臨床價值。本文就組織工程氣管移植過程中上皮、軟骨及血管再生情況及未來前景進(jìn)行綜述。
目的 觀察內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）參與肺腺癌新生血管的形成。 方法 利用攜帶 LacZ 基因的重組腺病毒，以最佳轉(zhuǎn)染濃度轉(zhuǎn)染EPCs，然后將EPCs經(jīng)肺腺癌動物模型的尾靜脈注入，分別在第 6、7、8 周取肺組織進(jìn)行病理切片，X-gal 染液顯色，觀察 EPCs 參與肺癌血管的形成。 結(jié)果 AD5F35LacZ 轉(zhuǎn)染 EPCs 的最佳感染復(fù)數(shù)（multiplicity of infection，MOI）為 400；當(dāng) MOI=400 時，AD5F35LacZ 的轉(zhuǎn)染率最大，為 97.13±2.08。LacZ 基因轉(zhuǎn)染的 EPCs 體外培養(yǎng) 2 周后開始增殖，移植入肺癌動物模型后，第8周參與肺癌組織新生血管的形成。 結(jié)論 EPCs 移植后參與了腫瘤新生血管的形成。
目的 研究天然水蛭素對人微血管內(nèi)皮細(xì)胞（human microvascular endothelial cells，HMVECs）增殖的影響及其誘導(dǎo)血管再生的機(jī)制。 方法 取 HMVECs 接種至 Matrigel 基質(zhì)膠培養(yǎng) 24 h，體外建立三維培養(yǎng)模型，于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。然后將細(xì)胞三維培養(yǎng)模型隨機(jī)分為不同濃度天然水蛭素培養(yǎng)組（1、4、7 ATU/mL 組）以及單純含 10%FBS 的 DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)組（對照組）。各組細(xì)胞三維培養(yǎng)模型加入對應(yīng)培養(yǎng)基后，培養(yǎng) 24、48、72 h 采用細(xì)胞計數(shù)試劑盒 8（cell counting kit 8，CCK-8）檢測細(xì)胞增殖情況；培養(yǎng) 24 h 行成管實驗并采用免疫熒光染色法測定細(xì)胞 VEGF 及 Notch1 表達(dá)水平。 結(jié)果 細(xì)胞三維培養(yǎng)觀察示，HMVECs 于基質(zhì)膠上貼附良好，24 h 時完全形成管腔樣結(jié)構(gòu)。CCK-8 檢測示，各時間點 1、4 ATU/mL 組 A 值均高于對照組（P<0.05），其中 4 ATU/mL 組最高；而 7 ATU/mL 組A 值顯著低于對照組以及 1、4 ATU/mL 組（P<0.05）。細(xì)胞成管實驗示，1、4 ATU/mL 組成管數(shù)量較對照組及 7 ATU/mL 組明顯增多，且 4 ATU/mL 組多于 1 ATU/mL 組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；7 ATU/mL 組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。免疫熒光染色示，與對照組比較，1、4 ATU/mL 組 Notch1 表達(dá)量增高，7 ATU/mL 組降低；其中 4、7 ATU/mL 組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。1、4、7 ATU/mL 組 VEGF 表達(dá)量均較對照組增高，4 ATU/mL 組高于 1、7 ATU/mL 組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 低、中濃度天然水蛭素可促進(jìn) HMVECs 增殖使血管再生，高濃度天然水蛭素則對 HMVECs 增殖及血管再生起抑制作用；其作用機(jī)制可能與 VEGF-Notch 信號通路有關(guān)。
目的通過 Micro-CT 及三維重建技術(shù)觀察天然水蛭素對大鼠缺血皮瓣血管生成的影響。方法選取 32 只成年 SD 大鼠，在其背部制備一8.0 cm×1.8 cm 大小的缺血皮瓣模型，然后隨機(jī)分為水蛭素組和對照組（n=16）。水蛭素組術(shù)后即刻和術(shù)后 3 d 內(nèi)每天皮下注射天然水蛭素 0.3 mL（含天然水蛭素 6 ATU），對照組皮下注射等量生理鹽水。術(shù)后 6 d，大體觀察皮瓣成活情況并測定皮瓣成活率，取材行 HE 染色觀察皮瓣組織學(xué)變化，行 Micro-CT 三維重建觀察并測量皮瓣血管容積、長度及數(shù)量。結(jié)果術(shù)后兩組大鼠均存活至實驗完成，無感染發(fā)生。術(shù)后 6 d，兩組皮瓣遠(yuǎn)端均發(fā)生不同程度壞死，水蛭素組皮瓣成活率為 72.11%±8.97%，顯著高于對照組的58.94%±4.02%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.280，P=0.008）。組織學(xué)觀察示水蛭素組較對照組組織結(jié)構(gòu)層次更清楚，有較多微血管生成，炎癥反應(yīng)及炎癥細(xì)胞浸潤更輕。Micro-CT 三維重建示水蛭素組皮瓣血管更多、更加密集；血管容積、長度及數(shù)量均顯著大于對照組（P<0.05）。結(jié)論天然水蛭素可減輕組織炎癥反應(yīng)、促進(jìn)缺血皮瓣血管的新生與再通，從而提高皮瓣成活率。