【摘要】 目的 觀察吸煙COPD 模型大鼠肺組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12( Caspase-12) 的基因和蛋白表達(dá)。方法 40 只成年雄性Wistar 大鼠隨機(jī)分為對照組、吸煙2 個月組、吸煙4 個月組及戒煙1 個月組。采用單純被動吸煙法復(fù)制大鼠COPD 模型。檢測各組大鼠第0. 3 秒用力呼氣容積與用力肺活量比值( FEV0. 3 /FVC) 和呼氣峰流速( PEF) 。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR) 檢測肺內(nèi)Caspase-12 mRNA 表達(dá), 免疫組化、Western blot 檢測其蛋白表達(dá), 熒光酶標(biāo)法檢測其活性。結(jié)果 大鼠吸煙2 個月后, 肺功能較對照組明顯下降( P lt;0. 05) , 肺結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞; 吸煙4個月后, FEV0. 3 /FVC 顯著下降( P lt;0. 05) , 肺結(jié)構(gòu)破壞明顯; 戒煙1 個月組肺功能較吸煙4 個月組稍好轉(zhuǎn), 肺結(jié)構(gòu)破壞仍明顯( P gt;0. 05) 。與對照組比較, Caspase-12 表達(dá)及活性在吸煙2 個月大鼠模型中升高( P lt;0. 05) , 在吸煙4 個月大鼠中明顯升高( P lt;0. 05) , 在戒煙1 個月組較吸煙4 個月組稍下降但無顯著差異( P gt;0. 05) 。結(jié)論 吸煙能夠誘導(dǎo)肺內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)凋亡基因Caspase-12 表達(dá)增加,促進(jìn)COPD 的發(fā)生與發(fā)展。
目的 初步探討吸煙對誘導(dǎo)痰和肺組織β-防御素2( BD-2) 表達(dá)水平的影響及其與慢性阻塞性肺疾病( COPD) 的關(guān)系。方法 將早期周圍型肺鱗癌擬行肺葉切除的患者分為COPD 吸煙組( COPD 組) 、非COPD吸煙組( 吸煙組) 和不吸煙組( 對照組) 。術(shù)前采用高滲鹽水霧化吸入誘導(dǎo)收集痰液, 術(shù)中收集腫瘤遠(yuǎn)處肺組織標(biāo)本, 對痰液進(jìn)行細(xì)胞分類計數(shù), HE 染色觀察肺組織病理學(xué)形態(tài),ELISA 方法測定痰和肺組織勻漿中的BD-2 濃度, 對BD-2 與吸煙指數(shù)、氣道炎癥指標(biāo)、肺通氣功能指標(biāo)進(jìn)行直線相關(guān)分析。結(jié)果 研究對象的肺組織病理學(xué)形態(tài)與試驗(yàn)分組高度吻合。對照組痰細(xì)胞總數(shù)、痰中性粒細(xì)胞比例、肺組織勻漿BD-2 濃度分別為( 2. 32 ±0. 51) ×106 / g、( 35. 7 ±9. 8) % 、( 14. 5 ±5. 7) ng/L, 吸煙組和COPD組痰細(xì)胞總數(shù)、痰中性粒細(xì)胞比例、肺組織勻漿BD-2 濃度則分別為( 4. 57 ±0. 87) ×106 / g、( 52. 5 ±10. 9) % 、( 78. 3 ±13. 1) ng/L 和( 6. 61 ±1. 03) ×106 / g、( 65. 5 ±12. 3) % 、( 127. 0 ±35. 0) ng/L, 以上3 項(xiàng)指標(biāo)在對照組、吸煙組、COPD組依次增高( P lt;0. 05) 。吸煙組和COPD 組痰淋巴細(xì)胞比例、痰BD-2 濃度分別為( 2. 5 ±1. 2) %、( 315. 0 ±124. 0) ng/L 和( 3. 2 ±1. 7) % 、( 298. 0 ±135. 0) ng/L, 以上2 項(xiàng)指標(biāo)兩組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義( P gt; 0. 05) , 但均高于對照組[ ( 1. 1 ±0. 3) % 、( 132. 0 ±48. 0) ng/L] ( P lt;0. 05) 。直線相關(guān)分析結(jié)果顯示痰BD-2 濃度與吸煙指數(shù)、痰細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞比例呈正相關(guān), 而肺組織勻漿BD-2 濃度與肺通氣功能呈負(fù)相關(guān)( P lt;0. 05) 。結(jié)論 吸煙導(dǎo)致痰液和肺組織BD-2 水平升高, 肺組織BD-2 表達(dá)狀況可能與吸煙個體的COPD易感性相關(guān)。
目的利用二代基因測序（NGS）技術(shù)對 2 例可疑肺結(jié)核病及肺非結(jié)核分枝桿菌病的肺部感染患者進(jìn)行明確診斷，同時進(jìn)行文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，探討 NGS 技術(shù)在病原微生物感染診斷方面的價值。方法收集 2 例擬診肺部感染待查患者的支氣管肺泡灌洗液，采用 NGS 技術(shù)檢測致病病原體基因。以 “二代測序 ”或 “NGS ”和 “微生物 ”或 “感染 ”為關(guān)鍵詞，通過萬方和中國知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫對 2000 年 1 月至 2018 年 1 月的中文文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，以 “NGS，infectious diseases，China ”為關(guān)鍵詞，通過 PubMed 數(shù)據(jù)庫檢索 2018 年 1 月前的英文文獻(xiàn)，結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)行分析。結(jié)果通過 NGS 分別檢測到結(jié)核分枝桿菌 1 例及非結(jié)核分枝桿菌 1 例。共檢索到中文文獻(xiàn) 221 篇，排除學(xué)位論文、會議論文和報紙，最終保留 “感染性疾病及傳染病 ”和 “呼吸系統(tǒng)疾病 ”學(xué)科分組中的期刊報道 10 篇，英文文獻(xiàn) 3 篇。報道中均提出 NGS 對相關(guān)病原體的診斷與研究作用。結(jié)論NGS 有望實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療的目的，如感染性疾病的早期診斷、控制傳播、精準(zhǔn)治療、良好預(yù)后等。
目的 探討過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α( PGC-1α) 和紅系衍生的核因子相關(guān)因子2( Nrf2) 對γ-谷氨酰半胱氨酸合酶( γ-GCS) 表達(dá)的調(diào)控及其在COPD中的作用和意義。方法 24 只大鼠隨機(jī)分為COPD 組和對照組。COPD 組用每日熏香煙和兩次氣管內(nèi)滴入脂多糖( LPS) 的方法制作COPD 模型。觀察大鼠的肺組織病理學(xué)改變, 檢測肺功能指標(biāo); 應(yīng)用免疫組化、Western blot、原位雜交和逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測肺組織中PGC-1α、Nrf2 和γ-GCS 的蛋白及mRNA表達(dá)情況。結(jié)果 COPD 組的肺功能指標(biāo)( FEV0. 3、FEV0. 3 /FVC、PEF) 和光鏡下COPD 組肺組織病理變化符合COPD 的特征性改變。PGC-1α、Nrf2 mRNA 在兩組大鼠肺組織中均有表達(dá), 且與γ-GCS mRNA 的表達(dá)部位基本一致; PGC-1α、γ-GCS 蛋白及mRNA 表達(dá)在COPD 組均顯著高于對照組( P 均lt;0. 05) ; Nrf2 蛋白表達(dá)在COPD 組較對照組顯著增高( P lt;0. 01) , 而Nrf2 mRNA 在兩組表達(dá)無明顯差異( P lt;0. 05) 。相關(guān)性分析顯示PGC-1α蛋白與Nrf2 蛋白及mRNA 表達(dá)均呈正相關(guān)( r 值分別為0. 775 和0. 515, P 均lt; 0. 01) , PGC-1α、Nrf2 蛋白與γ-GCS 蛋白( r 值分別為0. 531 和0. 575,P 均lt;0. 01) 及mRNA 表達(dá)( r 值分別為0. 616 和0. 634, P lt; 均0. 01) 均呈正相關(guān)。結(jié)論 PGC-1α可能作為Nrf2 的輔激活因子, 通過輔助激活Nrf2, 上調(diào)γ-GCS 的基因表達(dá); PGC-1α和Nrf2 可能通過一個共同通路協(xié)同上調(diào)γ-GCS 的基因表達(dá), 從而改善COPD 的氧化/ 抗氧化失衡。
目的 探討慢性阻塞性肺疾?。ê喎Q慢阻肺）患者肺組織中活化轉(zhuǎn)錄因子 3 （ATF3）、活化轉(zhuǎn)錄因子 4 （ATF4）的表達(dá)變化，以及ATF3和ATF4對γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）表達(dá)的影響，探討其在慢阻肺發(fā)病中的作用。 方法 收集伴或不伴慢阻肺并行肺葉切除的肺癌患者臨床肺組織標(biāo)本 40 例（慢阻肺組和對照組各 20 例），取材標(biāo)本均為遠(yuǎn)離原發(fā)肺癌病灶 5 cm 以上、肉眼觀察無肺癌浸潤的外周肺組織。所有患者術(shù)前均詳細(xì)詢問病史，進(jìn)行體格檢查、胸部 X 線片或肺部 CT 以及肺功能檢測。應(yīng)用原位雜交及免疫組化檢測患者肺組織中 ATF3、ATF4、γ-GCS 重鏈亞基（γ-GCS-HS）mRNA 及蛋白的表達(dá)，應(yīng)用免疫共沉淀法（CO-IP）檢測 ATF3、ATF4 與 γ-GCS-HS 蛋白之間的相互作用，并對 ATF3、ATF4 mRNA 及蛋白與 γ-GCS-HS mRNA 及蛋白進(jìn)行相關(guān)分析。 結(jié)果 慢阻肺患者肺組織中 ATF3、ATF4、γ-GCS-HS mRNA 及蛋白呈強(qiáng)陽性表達(dá)，較對照組顯著升高（P＜0.01）。在 γ-GCS-HS 抗體捕獲的免疫沉淀中，ATF3、ATF4 抗體均可雜交出明顯的蛋白條帶，且慢阻肺組較對照組明顯增強(qiáng)（P＜0.01）。相關(guān)分析顯示肺組織中 ATF3、ATF4 蛋白表達(dá)與 γ-GCS-HS mRNA 及蛋白表達(dá)均呈明顯正相關(guān)（P＜0.01）；ATF3、ATF4、γ-GCS-HS 蛋白表達(dá)與 FEV1%pred、FEV1/FVC 均呈明顯正相關(guān)（P＜0.01）。 結(jié)論 在慢阻肺患者發(fā)病過程中，氧化應(yīng)激誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子 ATF3 和 ATF4 過表達(dá)，ATF3和ATF4 可能通過影響 γ-GCS mRNA 和蛋白的表達(dá)而發(fā)揮抗氧化保護(hù)作用。
目的 通過研究Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1（Runt-related transcription factor 1，RUNX1）在經(jīng)卷煙煙霧提取物（cigarette smoking extract，CSE）刺激的大鼠氣道上皮細(xì)胞中的表達(dá)，探討RUNX1對上皮–間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的調(diào)控作用。方法 采用酶消化法提取大鼠的原代支氣管上皮細(xì)胞，并用不同濃度的CSE進(jìn)行刺激，采用CCK-8檢測細(xì)胞的活性，探索合適的CSE處理濃度。用CSE處理細(xì)胞后，構(gòu)建RUNX1干擾和過表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，使RUNX1基因沉默或過表達(dá)，用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測RUNX1蛋白的表達(dá)，用蛋白印跡法檢測RUNX1、核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、轉(zhuǎn)錄因子Snail、上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad）以及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白（vimentin，VIM）的表達(dá)。結(jié)果 支氣管上皮細(xì)胞的活力可被CSE降低，且降低程度與CSE的濃度成正比。通過CSE的誘導(dǎo)，原代大鼠支氣管上皮細(xì)胞E-cad表達(dá)水平顯著降低（P<0.05），RUNX1、NF-κB、Snail、VIM的表達(dá)水平明顯升高（均P<0.05）。干擾RUNX1基因后，E-cad表達(dá)上調(diào)（P<0.05），NF-κB、Snail、VIM的表達(dá)下調(diào)（均P<0.05）。而過表達(dá)RUNX1后，E-cad的表達(dá)下調(diào)（P<0.05），NF-κB、Snail、VIM的表達(dá)上調(diào)（均P<0.05）。結(jié)論 CSE可促進(jìn)氣道上皮細(xì)胞RUNX1的表達(dá)，RUNX1通過NF-κB/Snail通路調(diào)控EMT的進(jìn)程。
目的 探討大鼠低氧性肺動脈高壓( HPH) 形成過程中小泛素蛋白樣修飾蛋白1( SUMO-1) 在肺內(nèi)表達(dá)的動態(tài)變化規(guī)律及在HPH 發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 40 只Wistar 大鼠隨機(jī)分為常氧對照組、低氧3 d 組、低氧7 d組、低氧14 d 組及低氧21 d 組, 每組8 只。常壓間斷低氧暴露復(fù)制HPH大鼠模型。檢測各組大鼠的平均肺動脈壓( mPAP) 、右心室肥大指數(shù)( RVHI) 、血管形態(tài)學(xué)指標(biāo)[ 管壁面積/ 管總面積( WA%) ] ; 原位雜交、RT-PCR 檢測肺內(nèi)SUMO-1 mRNA 表達(dá), 免疫組化、Western blot 檢測其蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 低氧7 d至21 d, 大鼠肺小動脈開始出現(xiàn)明顯血管重塑并逐漸加重, 低氧7 d 時WA% 和mPAP 顯著高于對照組; 低氧14 d 時WA% 、mPAP 較7 d 時進(jìn)一步增加, RVHI顯著高于對照組; 低氧21 d 時WA% 、RVHI 較14 d 時進(jìn)一步增加。SUMO-1 mRNA 和蛋白在對照組肺小動脈壁呈弱陽性表達(dá); 低氧3 d 后顯著增高; 低氧14 d 達(dá)高峰; 低氧21 d 后mRNA 表達(dá)減弱但仍然高于對照組, 蛋白表達(dá)繼續(xù)保持高水平。SUMO-1 mRNA 和蛋白表達(dá)與mPAP、WA% 、RVHI 均呈正相關(guān)( P 均lt;0. 01) 。結(jié)論 慢性低氧誘導(dǎo)肺內(nèi)SUMO-1 表達(dá)增加在HPH 的發(fā)病過程中發(fā)揮一定的作用。