目的探討Notch信號通路重要靶點Hey1表達(dá)水平改變對BMP-9誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化與增殖的影響。 方法構(gòu)建過表達(dá)Hey1慢病毒LV-Hey1、抑制Hey1表達(dá)慢病毒LV-shHey1，分別感染C3H10T1/2細(xì)胞干預(yù)Hey1表達(dá)水平，以LV-Blank（空質(zhì)粒）感染C3H10T1/2細(xì)胞作為對照；以熒光顯微鏡對慢病毒感染效果、實時熒光定量PCR以及Western blot對Hey1表達(dá)水平進(jìn)行驗證，篩選不同Hey1表達(dá)水平的穩(wěn)定細(xì)胞系。用含BMP-9的條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)不同Hey1表達(dá)水平的C3H10T1/2細(xì)胞（分別為BMP-9+C3H10T1/2組、BMP-9+C3H10T1/2-Hey1組、BMP-9+C3H10T1/2-shHey1組），以正常培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞作為對照（C3H10T1/2組、C3H10T1/2-Blank組）。培養(yǎng)后48 h，實時熒光定量PCR及Western blot測定成骨分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Runx2、骨橋蛋白、骨鈣素mRNA及蛋白表達(dá)水平；4、5、6、7 d行MTT檢測及4、5、10 d行流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞增殖能力；4、7 d時ELISA測定細(xì)胞ALP表達(dá)水平并行染色觀察。 結(jié)果成功建立不同Hey1表達(dá)水平穩(wěn)定細(xì)胞系。成骨方面，各時間點與BMP-9+C3H10T1/2組比較，BMP-9誘導(dǎo)下Hey1過表達(dá)的BMP-9+C3H10T1/2-Hey1組細(xì)胞Runx2、骨橋蛋白、骨鈣素mRNA及蛋白表達(dá)水平以及成骨分化標(biāo)志物ALP含量均顯著增加（P < 0.05），抑制Hey1表達(dá)的BMP-9+C3H10T1/2-shHey1組細(xì)胞以上指標(biāo)均顯著降低（P < 0.05）。對細(xì)胞增殖活力影響方面，與BMP-9+C3H10T1/2組比較，BMP-9+C3H10T1/2-Hey1組MTT檢測吸光度（A）值及細(xì)胞G2+S期百分比均提高（P < 0.05）；而抑制Hey1表達(dá)BMP-9+C3H10T1/2-shHey1組以上指標(biāo)均降低（P < 0.05）。 結(jié)論Hey1表達(dá)是BMP-9誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞成骨分化重要環(huán)節(jié)，同時影響細(xì)胞早期增殖。
目的 探討急性百草枯(PQ)中毒鼠肺組織病理損傷和肺組織血紅素氧合酶-1（HO-1）的表達(dá)及三七總皂甙（PNS）的保護作用。 方法 150只SD雄性鼠分為正常對照組（C組）30只、PQ中毒組（PQ組）60只及PNS組60只。PQ組和PNS組一次性灌胃PQ 25 mg/kg染毒，C組給予等體積生理鹽水灌胃。其中PNS組于染毒前15 min以PNS 50 mg/kg陰莖靜脈注射保護，以后1次/d給藥直至處死前；PQ組、C組分別在同時間點給予等體積生理鹽水。觀察各組大鼠在中毒后6、12 h，1、3、5、7 d肺組織病理改變，采用蛋白質(zhì)印跡法分析肺組織HO-1蛋白表達(dá)和反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)方法測定鼠肺組織HO-1 mRNA的表達(dá)。 結(jié)果 C組HO-1蛋白和HO-1 mRNA絕大多數(shù)標(biāo)本有弱表達(dá)，個別標(biāo)本不表達(dá)；與C組相比PQ組及PNS組HO-1蛋白和HO-1 mRNA表達(dá)增強，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；PQ組HO-1蛋白和HO-1 mRNA的表達(dá)在1 d達(dá)高峰之后下降，第3天基本恢復(fù)到C組水平；PNS組與PQ組相似，但在6 h、12 h、1 d及3 d高于PQ組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），至第5天和第7天二者相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。PQ組肺組織病理損傷評分在6、12 h，1、3 、5、7 d各亞組均高于PNS相應(yīng)組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），C組肺組織病理大致正常，與PQ組及PNS組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.001）。 結(jié)論 HO-1參與PQ中毒所致急性肺損傷，PNS對PQ中毒所致急性肺損傷有保護作用。