目的 比較羧甲基化葡聚糖（CMD）磁性納米顆粒與脂質體LipofectamineTM 2000對人可溶性fms-樣酪氨酸激酶受體-1（sFlt-1）第2～4區(qū)基因片段的轉染率。方法 構建真核表達質粒編碼增強型綠色熒光蛋白質粒（pcDNA3.1-EGFP）/sFlt-1（2～4），采用酶切、電泳及基因測序鑒定。將實驗分為磁顆粒組、脂質體組和未轉染對照組進行。轉染后24、48 h，倒置相差熒光顯微鏡下觀察細胞綠色熒光分布；流式細胞儀檢測細胞綠色熒光表達率；逆轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）法和免疫蛋白印跡（Western blot）法檢測sFlt-1(2～4)mRNA和蛋白表達；噻唑藍（MTT）比色法觀測細胞生長情況，計算各組細胞相對增長率（RGR）；Hoechst細胞核染色法觀察各組細胞凋亡情況。結果 重組質粒pcDNA3.1/sFlt-1（2～4）酶切產物在瓊脂糖凝膠電泳時出現(xiàn)大小為915 堿基對的條帶。流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，磁顆粒組平均轉染率為45％，脂質體組平均轉染率21％；二者比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.541，P＜0.05）。RT-PCR和Western blot觀察發(fā)現(xiàn)，轉染后48 h磁顆粒組細胞sFlt-1（2～4） mRNA和蛋白表達均明顯高于脂質體組（t=2.454，2.398；P值均 lt;0.05）。轉染后24、48 h，磁顆粒組RGR與未轉染對照組間差異無統(tǒng)計學意義（t=1.436，P＞0.05），脂質體組RGR與未轉染對照組及磁顆粒組間差異均有統(tǒng)計學意義（t=2.412，2.545，P值均 lt;0.05）；磁顆粒組細胞凋亡率與未轉染對照組間差異無統(tǒng)計學意義（t=1.436，P＞0.05），與脂質體組間差異有統(tǒng)計學意義（t=2.236，P＜0.05）。結論 CMD磁性顆粒較脂質體LipofectamineTM 2000可獲得更高的sFlt-1(2～4) 基因片段轉染率。
引用本文： 江丹,吳強,賈麗麗,宋蓓雯,杜新華. 羧甲基葡聚糖磁性納米顆粒與脂質體介導人可溶性fms-樣酪氨酸激酶受體-1的轉染比較. 中華眼底病雜志, 2010, 26(3): 231-235. doi: 復制
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