• 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院 器官移植研究院(武漢,430030);

目的 確定SP1誘騙性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介導下轉(zhuǎn)染豬血管內(nèi)皮細胞系SV-40-PED的最佳轉(zhuǎn)染條件和效果。方法 以SV-40-PED為轉(zhuǎn)染對象,在6孔培養(yǎng)板中,接種SV-40-PED細胞2×105/孔,將4 μl Oligofectamine和不同濃度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分別溶于100 μl無血清、無抗生素的DMEM培養(yǎng)基,室溫放置20min后轉(zhuǎn)染細胞,SP1 ODNs最終濃度分別為50、100、150、200和250 nmol/L、轉(zhuǎn)染26 h檢測不同濃度轉(zhuǎn)染情況,確定最佳SP1 ODNs與Oligofectamine的比率、轉(zhuǎn)染時間;流式細胞儀檢測細胞內(nèi)的相對熒光強度及攝取率評價轉(zhuǎn)染效率;熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)熒光分布;測定細胞上清乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量,觀察細胞損傷情況。結(jié)果〓SV-40-PED在Oligofectamine的介導下可以攝取SP1 ODNs。SP1 ODNs終濃度為50、100、150 nmol/L 組細胞形態(tài)無明顯變化,終濃度為200、250 nmol/L組細胞收縮、變圓后逐漸恢復;SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時, 轉(zhuǎn)染26 h時細胞形態(tài)也無明顯變化,48、72 h時有細胞漂浮現(xiàn)象。熒光下觀察,轉(zhuǎn)染成功各組熒光物質(zhì)分布于細胞核內(nèi),其中SP1 ODNs終濃度為200、250nmol/L組可見清晰核仁,濃度越高,熒光強度越強,細胞內(nèi)熒光物質(zhì)主要聚集于細胞核。SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時,轉(zhuǎn)染72 h組LDH濃度為137.12±3.92 U/L,顯著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L,均有統(tǒng)計學意義(P lt;0.01);當轉(zhuǎn)染時間為26 h時,各濃度組上清液LDH值差異無統(tǒng)計學意義(P gt;0.05)。結(jié)論SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L、轉(zhuǎn)染26h時可以為SV-40-PED轉(zhuǎn)染提供良好效果。

引用本文: 黃亞冰,徐婧,陳松,謝林,王璐,尹注增,左利群,陳實. Oligofectamine介導轉(zhuǎn)錄因子SP1誘騙性寡核苷酸轉(zhuǎn)染豬內(nèi)皮細胞系條件的優(yōu)化研究. 中國修復重建外科雜志, 2007, 21(8): 877-881. doi: 復制

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