目的 觀察家豬骨髓間充質干細胞 (marrow mesenchymal stem cells, MSCs) 在體外誘導條件下成骨分化的特征及相關基因的表達。方法 選取3月齡雌性長白豬6頭，無菌條件下于脛骨近端抽取骨髓15 ml。采用密度梯度離心法并根據(jù)細胞貼壁特性對MSCs進行分離、純化，倒置相差顯微鏡觀察原代細胞生長情況，于培養(yǎng)第7天計算MSCs百分比含量及群體倍增值。將第1代細胞置于含1×10-8 mmol/L 地塞米松(dexamethasone, Dex)、10 mmol/Lβ-磷酸甘油(β-glycerophosphate, β-GP)和82 μg/ml 抗壞血酸(ascorbic acid, Asc)的成骨誘導培養(yǎng)液中培養(yǎng)21 d，作為實驗組；DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)作為對照組。分別行細胞形態(tài)學觀察、堿性磷酸酶 (alkaline phosphatase, ALP)組織化學染色、鈣沉積和細胞增殖測定，采用實時定量PCR分析成骨分化的相關基因表達。結果 原代MSCs特征：培養(yǎng)第1天，有核細胞大部分由懸浮的圓形血源性細胞組成；第3天換液棄除非貼壁細胞，MSCs克隆開始形成，細胞呈成纖維細胞樣生長；第7天，鏡下觀察到大小不一的克隆。細胞在培養(yǎng)后12～14 d基本長滿，原代細胞群體倍增值平均為13。MSCs成骨分化：誘導培養(yǎng)14 d實驗組細胞形態(tài)由成纖維細胞樣變成立方體樣，而對照組細胞始終保持成纖維細胞樣。培養(yǎng)5 d，對照組細胞計數(shù)為11 723±4 040，實驗組為10 276±5 513，二者差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。與對照組相比，實驗組誘導培養(yǎng)14 d，ALP染色呈強陽性，21 d鈣沉積明顯增加 (P＜0.01)。實驗組MSCs成骨相關基因：核心結合因子α1 (core binding factor α1, Cbfα1)、osterix、ALP、Ⅰ型膠原、骨連接素(osteonectin, ON)、骨鈣素(osteocalcin, OC)表達逐漸增強；Cbfα1、ALP、ON在分化早期增加明顯；與第7天比較，第21天osterix和OC基因表達明顯上調 (P＜0.05)；第14天，Ⅰ型膠原表達也上調 (P＜0.05)。結論 密度梯度離心法分離的豬MSCs，在體外誘導條件下能通過上調分化特異基因表達向成骨細胞分化。
引用本文： 鄒立津,呂農華,馮文周,鄒學農. 體外誘導家豬骨髓間充質干細胞向成骨細胞分化. 中國修復重建外科雜志, 2007, 21(11): 1222-1227. doi: 復制
版權信息： ?四川大學華西醫(yī)院華西期刊社《中國修復重建外科雜志》版權所有，未經授權不得轉載、改編