目的 觀察釉基質(zhì)蛋白（enamel matrix proteins，EMPs）對體外培養(yǎng)的人正常皮膚成纖維細胞黏附、增殖及Ⅰ型膠原前mRNA合成的影響。 方法 取自愿捐贈包皮環(huán)切術(shù)后包皮組織，采用組織塊法培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，取第3 ～ 6 代細胞進行實驗。以終濃度為50、100、150、200 μg/mL 的EMPs 工作液預(yù)鋪培養(yǎng)板。①細胞黏附實驗：取細胞以1 × 106 個/mL 置于預(yù)鋪EMPs 的96 孔培養(yǎng)板，每孔0.2 mL，作為實驗組（A、B、C、D 組）。培養(yǎng)1.5、3.0 和4.5 h 后MTT 比色法測定黏附細胞量。②細胞增殖實驗：取細胞以5 × 104 個/mL 置于預(yù)鋪EMPs 的培養(yǎng)板，每孔0.2 mL，作為實驗組（A1、B1、C1、D1 組）。于第2、4、6、8 天以MTT 比色法測定增殖細胞量。③細胞Ⅰ型膠原前mRNA 合成實驗：取細胞以1 × 106 個/mL 置于預(yù)鋪EMPs 培養(yǎng)板，每孔2 mL，作為實驗組（A2、B2、C2、D2 組）。于培養(yǎng)第5 天RT-PCR 法測定Ⅰ型膠原前mRNA 合成的量。以上實驗均以相同濃度細胞懸液加入未預(yù)鋪EMPs 的板孔作為對照組，每組均3 個復(fù)孔。 結(jié) 果 ①細胞黏附實驗中，各時間點B、C、D 組與A 組及對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；A 組與對照組間及B、C、D 組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。②細胞增殖實驗中，第2 天各組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt;0.05） ；第4、6 天，B1、C1、D1 組吸光度（A）值分別為0.598 ± 0.020、0.582 ± 0.017、0.574 ± 0.021 及0.639 ± 0.016、0.641 ±0.020、0.635 ± 0.021，均高于對照組的0.548 ± 0.021 及0.605 ± 0.019（P lt; 0.05） ；A1 組A 值分別為0.545 ± 0.023 及0.603 ±0.016，與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。第8 天，B1、C1 組A 值分別為0.629 ± 0.012、0.631 ± 0.014，高于對照組的
0.606 ± 0.031（P lt; 0.05），A1、D1 組與對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。③細胞Ⅰ型膠原前mRNA 合成實驗中，B2、C2、D2 組Ⅰ型膠原前mRNA 合成量高于對照組。 結(jié)論 EMPs 促進人正常皮膚成纖維細胞黏附、增殖及Ⅰ型膠原
前mRNA 合成，且EMPs 在100 μg/mL 濃度時可發(fā)揮最大促進作用。
引用本文： 肖博,郭樹忠,潘勇,劉丹. 釉基質(zhì)蛋白對人皮膚成纖維細胞黏附、增殖及Ⅰ型膠原前mRNA 合成影響的體外研究. 中國修復(fù)重建外科雜志, 2008, 22(9): 1113-1116. doi: 復(fù)制
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