張蔓菁 1 , 劉賓 2 , 楊陽 2 , 李楊 2 , 魯開化 2
  • 1 昆明醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院整形外科(昆明,650031);;
  • 2 第四軍醫(yī)大學西京醫(yī)院整形外科 全軍整形外科研究所;

目的 研究脫細胞血管基質(zhì)快速高效的制備方法并對其進行生物相容性評價,為組織工程血管的研究尋找合適的支架材料。 方法 取20 根長50 mm 新鮮山羊頸動脈經(jīng)—80℃冷凍、37℃水浴復溫,反復凍融3 次,在506 MPa、4℃條件下超高壓處理20 min,0.125%SDS 中37℃振搖(100 r/min)12 h,徹底去除細胞后,行HE 染色、Masson染色、掃描電鏡觀察及生物力學測定研究其組織結構的變化;Hoechst33258 熒光染色和細胞DNA 殘留量分析評價脫細胞效果;通過接觸細胞毒性實驗、MTT 活性測試及皮下埋植實驗對制備的脫細胞血管基質(zhì)進行生物相容性分析。皮下埋植實驗取清潔級SD 大鼠10 只,體重200 ~ 230 g,分為2 組(n=5),實驗組于大鼠背部皮下埋植結合物理化學方法處理的脫細胞血管基質(zhì),對照組埋植單純物理方法處理的脫細胞血管基質(zhì),分別于術后1、2、3、4、8 周取出行HE 染色觀察。 結 果 HE 染色及Masson 染色顯示脫細胞血管基質(zhì)無細胞成分殘留,保持較完整的膠原成分;掃描電鏡觀察血管表面以膠原為主,適合細胞黏附;Hoechst33258 熒光染色脫細胞血管基質(zhì)材料未見明顯陽性核染色;苯酚- 氯仿提取脫細胞血管基質(zhì)殘留DNA 含量,電泳檢測分析顯示其中DNA 含量較正常血管顯著降低;生物力學檢測示脫細胞血管基質(zhì)最大荷載時的應力及應變與正常血管比較差異無統(tǒng)計學意義,保持了正常血管的力學特征;接觸細胞毒性實驗與MTT 法測定示脫細胞血管基質(zhì)與細胞有良好的黏附性,細胞毒性為0 ~ 1 級;實驗組皮下埋植術后8 周材料周圍基本未見炎性細胞,對照組仍有明顯淋巴細胞浸潤。 結論 經(jīng)反復凍融、超高壓及小劑量SDS 處理的脫細胞血管基質(zhì)是一種構建組織工程血管的理想支架材料。

引用本文: 張蔓菁,劉賓,楊陽,李楊,魯開化. 羊頸動脈脫細胞血管基質(zhì)的制備及其生物相容性評價. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(7): 843-849. doi: 復制

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