目的 探討大鼠血清體外擴增BMSCs 的可能性，及淤膽大鼠血清和肝細胞生長因子（hepatocyte growth factor，HGF）體外誘導其分化為肝細胞，解決肝組織工程細胞來源短缺的可行性。 方法 取6 周齡健康雌性Wistar 大鼠股骨和脛骨骨髓細胞，分離、純化并傳代培養(yǎng)BMSCs。取12 ～ 14 周齡健康Wistar 大鼠40 只，隨機分為兩組（n=20），制備正常及淤膽大鼠血清。取第3 代BMSCs 按培養(yǎng)液不同分組：A 組，DMEM 加10%FBS；B 組，肝細胞生長培養(yǎng)基（hepatocyte growth medium，HGM）加5%FBS；C 組，HGM 加5% 正常大鼠血清；D 組，HGM 加5% 淤膽大鼠血清；E 組，HGM 加5% 淤膽大鼠血清、25 μg/L HGF。觀察各組誘導培養(yǎng)過程中的細胞形態(tài)變化，MTT 法測定細胞生長曲線，免疫細胞化學法檢測甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、細胞角蛋白18（cytokeratin 18，CK18）表達，高碘酸- 希夫染色檢測糖原表達，脲酶- 谷氨酰脫氫酶法檢測上清液尿素含量。 結果 誘導培養(yǎng)過程中D、E 組出現(xiàn)多角形及雙核細胞，A、B、C 組細胞形態(tài)無明顯變化。MTT 生長曲線顯示C 組細胞生長速度最快，B 組最慢，與A、D、E 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05），A、D、E 組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。D、E 組于誘導培養(yǎng)7 d 開始出現(xiàn)AFP 及CK18 陽性表達，14 d 開始出現(xiàn)糖原陽性表達，同時間點E 組陽性表達率高于D 組（P lt; 0.05）；D、E 組上清液中尿素含量隨誘導時間延長逐漸升高，同時間點E 組高于D 組（P lt; 0.05）。各時間點A、B、C 組均未見AFP、CK18、糖原陽性表達，尿素濃度無明顯變化。 結論 正常大鼠血清能明顯促進BMSCs 增殖；淤膽大鼠血清對BMSCs 有一定促增殖作用，且能有效誘導其向肝細胞分化；聯(lián)合使用淤膽血清和HGF 能提高細胞分化率。
引用本文： 鐘曉琳,萬居易,王忠瓊,胡蓮,李昌平. 淤膽血清及肝細胞生長因子體外誘導BMSCs 向肝細胞分化. 中國修復重建外科雜志, 2010, 24(3): 344-349. doi: 復制
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